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波尔山羊冷冻精液的制作及受胎效果试验数据


放大字体  缩小字体 发布日期:2015-02-11  浏览次数:580
为了有效地进行波尔山羊的选育提高,波尔山羊杂交改良和新品系的培育,有效地利用波尔山羊种质资源,我们进行了波尔山羊冷冻精液的制作和受胎试验。在初试的基础上,进行了中区试验,在苏、鲁、豫3省九县47个配种站(点)为4204只母羊输入冷冻精液,第一情期受胎率71.21%,现将结果报告如下:

  1、材料与方法
  1.1精液采集 假阴道法常规采精,要求精液颜色、气味正常,PH值6.4—6.8,密度每毫升15亿以上,活力0.75以上。采得的精液根据密度、活力按1∶2—5的比例稀释。
  1.2稀释液 A方:乳糖6克、柠檬酸钠1.5克、蒸馏水100毫升。B方:乳糖3.8克、葡萄糖2.6克、柠檬酸钠1.3克、蒸馏水100毫升。C方:乳糖4.6克、葡萄糖3.1克、柠檬酸钠1.5克、蒸馏水100毫升。取A方、B方液各80毫升,C方液105毫升,分别加入卵黄20毫升,甘油5毫升,青、链霉素各10万单位。
  1.3平衡 在冰箱下层温度1-4℃的条件下,将稀释后经封闭的精液置入进行平衡。
  1.4冻精颗粒的制作 采用铝盒氟板制冻法,将氟板浸入盛有液氮的铝盒内,待沸腾停止后,将氟板取出置于液氮上方2—3厘米,即可滴冻,剂量为每颗粒0.1毫升。
  1.5解冻 采用水浴快速解冻,将含有1.8—2.9%柠檬酸钠解冻液0.5毫升置入试管内在45至60℃的温水中浴热1分钟,将冷水颗粒投入试管内,经摇动溶化至2/3时取出,轻摇至全部溶化。
  1.6输精 采用阴道输精和子宫颈口输精两种方法。

  2、试验结果
  2.1稀释液的筛选
用三种不同稀释液进行冷冻效果比较试验,从解冻后活率及复苏率两个指标来看,以C方效果最好,多次重复解冻活率均在45%以上。与A 方、B方比较,差异极显著(P<0.01),结果见表1。

表1 不同稀释液冷冻效果比较 (单位:%)

配方代号 重复次数 原精活率 冻前活率 解冻活率 复苏率
A方 8 83 65 22 29.73
B方 15 81.8 71.7 27 35.34
C方 24 82.4 78.6 49.7 61.97

  2.2冷冻技术试验
  2.2.1不同平衡时间对冷冻效果的影响 在利用尿素进行降温平衡的特定条件下,15分钟、30分钟、1小时、1.5小时、2小时、3小时6种平衡时间的精子复苏率分别为46.67%、52.63%、64.52%、60%、60.8%和55.17%,以平衡1小时的解冻活率最高,15分钟、30分钟最低。随着平衡时间的逐渐延长,解冻活率有逐渐延长,解冻活率逐渐下降的趋势。
  2.2.2氟板与液面距离对冷冻效果的影响 在氟板距液氮面1、2、3、4厘米的条件下,取原精活力0.75,平衡后活力0.7时精液分别进行冷冻,重复观察15次,冻后活力分别为0.4、0.55、0.45、0.4,以氟板距液氮面2厘米冷冻效果最好,精子复苏率达75.86%,分别比1厘米、3厘米、4厘米高20.69%、13.79%、20.69%,但统计学分析,差异不显著(P>0.05)。
  2.2.3不同水温对冻精解冻活率的影响 分别利用35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃8个不同梯度的水温对冷冻颗粒进行解冻,结果45—60℃的水温取得精子复苏率74.6%的解冻效果,与35℃的解冻效果比较,差异极显著(P<0.01),与65℃解冻效果比较差异不显著(P>0.05),与70℃解冻效果比较差异显著(P<0.05),说明水温偏低或偏高对精子的复苏都不利。
  2.2.4不同浓度解冻液对解冻后精液存活指数的影响 在30℃的温度条件下保存解冻后活力0.5以上的精液,结果含有1.3%、2.2%、2.9%柠檬酸钠解冻液的存活指数分别为2.8、3.6、3.2,以含2.2%,柠檬酸钠解冻液的存活指数最高。

  3、受胎效果试验
  选用C配方稀释液制作冷冻精液颗粒,对母羊进行受胎效果试验,并把输入鲜精和自然交配作为对照组,结果第一情期受胎率冻精组为71.21%,鲜精组为75.24%,自然交配组为75.56%,冻精组的受胎率分别比鲜精组和自然交配组低4.03%和4.35%,但组间差异不显著(P>0.05),结果见表2。

表2 :冷冻精液受胎效果及比较 (单位:只、%)

组别 试验种类 颗粒种类 配种羊数 调查羊数 受胎羊数 受胎率 产羔母羊数 产羔数 产羔率


冷冻精液 初试 波尔山羊 88 78 54 69.23 48 103 214.58
本地山羊 46 44 30 68.18 25 54 216.00
中试 波尔山羊 2210 1100 786 71.45 750 1637 218.27
本地山羊 1860 900 641 71.22 630 1300 206.35
小计 4204 2122 1511 71.21 1453 3094 212.94
对照组 鲜精 本地山羊 450 315 237 75.24 231 486 205.06
自交 本地山羊   34 34 75.56 34 74 211.43

  3.1母羊年龄、胎次对受胎效果的影响 因母羊的年龄与胎次呈强正相关,所以年龄与胎次的影响是基本一致的。将母羊按1岁以下,1—2岁、2—3岁、3岁以上分成4组,其冷冻精液配种第一情期受胎率分别为63.04%(46/29)、76.89%(212/163)、71.08%(83/59)和63.79%(58/37)。将母羊按处女1—3胎、4—6胎、6胎以上分成4组,受胎率分别为62.69%(67/42)、74.38%(160/119)、72.11%(147/106)和68.00%(25/17),以1—2岁,1—3胎受胎率最高, 2—3岁,4—6岁胎次之,但统计分析,各组组间差异不显著(P>0.05)。
  3.2不同输精方法对受胎效果的影响 统计子宫颈口输精259只母羊,结果有204只受胎,受胎率78.76%,比阴道输精的60%(140/84)高18.76%,二者比较,差异极显著(P<0.01)。
3.3不同颗粒数对受胎效果的影响 对38只母羊进行2颗粒子宫颈口输精,结果有30只受胎,受胎率78.95%,另59只母羊进行1颗粒子宫颈口输精,结果有41只受胎,受胎率69.49%,前者比后者高9.46%(P>0.05)。

  4、讨论与分析
  4.1 我们根据波尔山羊鲜精按1∶50比例稀释,每羊输入0.5毫升能够保持较高受胎率的结果,冻精颗粒一律用0.5毫升解冻液进行再稀释,使母羊输入的有效精子数在0.2亿左右(1颗粒)。仍取得了69.49%的受胎率,但比输入0.4亿(2颗粒)的受胎率降低了9.46(P>0.05),这与鲜精类似,试验取得的结果是一致的。因此建议波尔山羊冻精颗粒内的有效精子数以0.3—0.4亿为宜。
  4.2 在波尔山羊冻精颗粒的制作过程中,要保证平衡后精液的温度不得回升,否则往往影响冻精颗粒的解冻活率。
  4.3 处女羊由于个体较小,使用开腔器困难,而采用阴道输精法又影响受胎效果,有待进一步探讨。
 
 
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